郑州治疗白癜风的医院匹那地尔对慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响
匹那地尔对慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响
匹那地尔对慢性支气管炎患者肺泡巨噬细胞胞内游离钙浓度的影响
中华结核和呼吸感染 1999年第12期第22卷 论著摘要
作者：宋满景 李旭 王蓓
单位：030001 太原，山西医科大学第二医院呼吸科
我们试图以钾通道开放剂匹那地尔［1］对慢性支气管炎（慢支）缓解期肺泡巨噬细胞（AM）胞内游离钙浓度的影响探讨该药用于治疗慢支的可能性。
对象与方法 慢支缓解期组12例，其中男10例，女2例，年龄35～60岁。结合病史、体征、胸部X线检查确诊，符合1980年全国慢性支气管炎临床专业会议诊断标准［2］。对照组为11例门诊患者健侧肺，其中男7例，女4例，年龄30～62岁。支气管肺泡灌洗术前1周内未使用糖皮质激素及支气管扩张剂等药物。AM的提取和纯化参照文献［3］进行，纯化后的AM存活率在95%以上。参照Grynkiewicz等［4］的方法，将上述两组已纯化的AM悬浮于含2 mmol/L谷氨酸、10 mmol/L的HEPES和0.1%牛血清白蛋白的RPMI 1640培养基中，调整细胞浓度至1×109/L，37℃预温5分钟后加入Fura-2/AM（中国医学科学院药物研究所，终浓度为5μmol/L），37℃恒温振荡45分钟，用含0.1%牛血清白蛋白的D-Hanks液洗涤3次，以无钙盐水（pH7.4）37℃孵育5分钟后置RF-5000型荧光分光光度计（日本Shimadzu公司），测定AM胞浆游离钙浓度，激发波长340 nm和380 nm，发射波长500 nm，激发光栅5 nm，发射光栅10 nm。所加氯化钙、LPS和匹那地尔（国家医药管理局天津药物研究所）的终浓度分别为1 nmol/L、10 mg/L、10 mg/L，匹那地尔先于LPS与AM孵化10分钟加入。AM胞浆游离钙浓度的测定所用公式为：［Ca2+］i=Kd×(Sf2/Sb2)·(R-Rmin)/(Rmax-R)，其中Kd为Ca2+结合常数（224 nmol/L），R、Rmin和Rmax分别为测得的λ340 nm和λ380 nm的荧光比值，最大荧光比值、最小荧光比值，Sf2和Sb2分别为无Ca2+和饱和Ca2+时λ380 nm激发光产生的荧光强度。
统计学处理：数据以±s表示，组间比较采用t检验。
结果 （1）慢支组AM胞浆内基础钙离子浓度与对照组比较（P＜0.05）；细胞外无钙情况下，LPS可促进两组AM胞内游离钙浓度升高，但差异无显著性，但与各自的基础钙值相比差异有显著性（P均＜0.05），AM胞内游离钙浓度在加入匹那地尔及LPS时低于仅加LPS的游离钙浓度，差异有显著性（P均＜0.05）。（2）细胞外有钙情况下，AM的静息钙浓度较其基础钙值显著增高（P均＜0.05），加入LPS后AM胞内游离钙浓度进一步增高，与各自静息钙值相比差异有显著性（P均＜0.05），提前加入匹那地尔可明显抑制LPS对AM胞内游离钙浓度的升高（P均＜0.05）。
讨论 本组实验表明无论有无外钙LPS均可促进AM内游离钙浓度升高，可能为LPS与AM表面受体相结合，触发了细胞膜转导的效应系统激活［5］，进而使钙通道激活，导致钙内流以及磷酸肌醇系统激活使内质钙释放所致。我们还发现无论有无外钙，匹那地尔均能抑制LPS引起的AM胞内游离钙浓度升高，提示匹那地尔不仅能促进钾离子通道开放使钾离子外流，AM超极化，关闭电压依赖性的钙离子通道致钙离子内流减少，而且还可抑制细胞内钙池的释钙作用。因此胞浆游离钙浓度升高是细胞激活的表现。匹那地尔抑制AM胞浆内游离钙浓度升高，可使慢支患者AM激活数量减少，内环境趋于正常，加之匹那地尔对支气管平滑肌痉挛也有抑制作用，这对于延缓慢支的病情发展解除支气管痉挛，改善通气有一定意义。
参考文献
1 王大元.钾通道开放剂——新型抗高血压病.中国药学杂志,1992,27:.
2 中华医学会呼吸病学分会.慢性支气管炎临床诊断及疗效判断标准.中华结核和呼吸系疾病杂志,1980,3:.
3 Iwamoto GK, Monick MM, Burmeister LF,et al. Interleukin-1 release by human alveolar macroghages and blood monocytes. Am J Physiol,1989,256:.
4 Grynkiewicz G, Poenie M, Tsien RY. A new generation of Ca2+ indicators with greatly improved fluorescence properties. J Biol chem,1985,260:.
5 Naoko W, Junko S, Yoshoro K. Role of Calcium in tumor necrosis factor-2 production by activated macrophages. J Biochem,1996,120:.
表1 匹那地尔对LPS促进肺泡巨噬细胞胞浆游离钙升高的影响（nmol/L，±s）
组 别
例数
基础钙
基础钙
静息钙
静息钙
(+LPS)
(+匹那地尔+LPS)
(+LPS)
(+匹那地尔+LPS)
对照组
11
61±6
91±10
67±8
130±16
161±20
137±16
慢支组
12
68±7△
90±9*
74±10**
129±14
159±13#
134±15##
注：与对照组基础钙值比较△P＜0.05;加LPS后基础钙值比较P＜0.05，加匹那地尔+LPS后基础钙值比较**P＜0.05;与对照组加LPS后静息钙值比较#P＜0.05;加匹那地尔+LPS后静息钙值比较##P＜0.05收稿： 修回：
